بررسي اثر چند نوع فرمولاسيون باکتري سودوموناس - دانلود رایگان
دانلود رایگان قارچ بيمارگرRhizoctonia solaniبه دليل دامنه ميزباني بالا، قدرت تهاجم بالا و دوام زياد يکي از مهمترين عوامل بيماريزاي گياهي محسوب مي‌‍شود. به منظور کنترل
دانلود رایگان
| بررسي اثر چند نوع فرمولاسيون باکتري سودوموناس فلورسنت بر روي قارچ Rhizoctonia solani عامل مرگ گياهچه لوبيافهرست مطالب چکيده ك فصل اول ل اهداف تحقيق:16 فصل دوم17 1-2- مفاهيم کنترل بيولوژيک:18 2-2- ريزوسفر18 1-2-2- ديگر ويژگي هاي لازم براي کلونيزاسيون: فلاژلا:21 3-2- استفاده از باکتري هاي سودوموناس فلورسنت در کنترل بيولوژيک:22 ويژگي هاي جنس سودوموناس که سبب شده يک عامل بيوکنترل خوب باشد:23 روش مستقيم:24 روش غيرمستقيم:24 1-3-2- توليد فيتوهورمون ها:25 2-3-2- توليد آنتي بيوتيک:25 3-3-2- سيدروفور:26 4-3-2- سيانيدهيدروژن (HCN):27 4-2- کنترل بيولوژيک Rhizoctonia solani:27 5-2- استفاده از ريزوباکتري هاي تحريک کننده رشد گياهان:28 1-5-2- ويژگي هاي يک PGPR موفق براي فرمولاسيون:28 2-5-2- ويژگي هاي يک فرمولاسيون ايده ال:28 6-2- حامل ها در رشد فرمولاسيون:29 1-6-2- انواع فرمولاسيون:30 2-6-2- فرمولاسيون تالک:30 3-6-2- پيت :31 4-6-2- ورمي کوليت :31 7-2- عمل آوري و کاربرد فرمولاسيون :33 8-2- توجهات لازم در فرمولاسيون :33 1-8-2- محيط تخمير:34 2-8-2- مرحله خشک کردن :34 9-2- سيستم نقل و انتقال باکتري ها35 1-9-2- تيمار بذر:35 2-9-2- مزايا و معايب تيمار بذر:35 3-9-2- تيمار خاک:36 4-9-2- ساير روش هاي بکارگيري فرمولاسيون :37 5-9-2- سيستم انتقال چندگانه :37 10-2-فرمولاسيون به همراه مواد شيميايي افزوده شده به فرمولاسيون :38 11-2- فرمولاسيون استرين منفرد :39 12-2- فرمولاسيون استرين هاي مخلوط:39 13-2- تجاري سازي:40 1-13-2- محدوديت در تجاري سازي :42 2-13-2- محصولات تجاري سازي شده :43 14-2- ويژگي هاي قارچ Rhizotonia solani :43 فصل سوم45 1-3- تهيه قارچ:46 1-1-3- نگهداري قارچ بيمارگر: از دو روش استفاده شد:46 2-3- جداسازي باکتري از خاک :46 1-2-3- نگهداري باکتري:47 2-2-3- قدرت بازدارندگي جدايه هاي باکتريايي از رشد قارچ بيمارگر 47 3-3- شناسايي جدايه هاي باکتريايي :48 4-3- آزمايشات گلخانه اي :48 1-4-3- تهيه مايه تلقيح بيمارگر و اثبات بيماريزايي برروي لوبيا48 2-4-3– تهيه مايه تلقيح جدايه هاي آنتاگونيست :49 3-4-3- آغشته سازي بذور با باکتري هاي آنتاگونيست :50 4-4-3-بررسي خواص بازدارندگي باکتري هاي آنتاگونيست در گلخانه50 5-3- قدرت کلونيزاسيون51 1-5-3- بررسي ميزان کلونيزاسيون بذر لوبيا توسط استرينVUP50 وCHA051 2-5-3- بررسي قدرت کلونيزاسيون ريشه دو استرين VUP50 و CHA051 6-3- توليد ترکيبات ضد قارچي52 1-6-3- بررسي توليد آنتي بيوتيک :52 2-6-3- توليد ترکيبات فرار ضد قارچي:52 3-6-3- توليد سيدروفور:52 4-6-3- توليد پروتئاز:53 5-6-3- توليد سيانيد هيدروژن:53 7-3- فرمولاسيون54 1-7-3- تهيه فرمولاسيون:54 2-7-3- ماندگاري فرمولاسيون:54 3-7-3- اثر فرمولاسيون تهيه شده در کنترل قارچ بيمارگر:55 8-3- تجزيه و تحليل آماري:56 فصل چهارم57 نتايج57 1-4- جداسازي باکتري ها از مناطق مختلف:58 2-4- تست هاله بازدارندگي:58 3-4- شناسايي جدايه ها60 4-4- نتايج اثبات بيماريزاي R. solaniAG-4بر روي لوبيا:64 5-4- نتايج تست گلخانه:64 6-4- توليد آنتي بيوتيک و ترکيبات فرار:71 1-6-4- بررسي توليد پروتئاز، سيانيد هيدروژن وسيدروفور:71 7-4- ميزان کلونيزاسيون بذر لوبيا توسط استرين VUP50 و CHA0:71 8-4- نتايج تاثير فرمولاسيون هاي مختلف بر شاخص هاي رشدي گياه....72 1-8-4- وزن تر ريشه:72 2-8-4- وزن خشک ريشه:73 3-8-2- وزن تر اندام هوايي:75 4-8-4- وزن خشک اندام هوايي:76 5-8-4- درصد گياهچه سالم:78 6-8-4- درصد کاهش بيماري:80 7-8-4- نتايج بررسي جمعيت در فرمولاسيون:81 بحث87 فهرست جداول فهرست نمودارها چکيده قارچ بيمارگرRhizoctonia solaniبه دليل دامنه ميزباني بالا، قدرت تهاجم بالا و دوام زياد يکي از مهم ترين عوامل بيماريزاي گياهي محسوب مي شود. به منظور کنترل بيولوژيک قارچ R.solani AG-4عامل مرگ گياهچه لوبيا با باکتري هاي آنتاگونيست از سه منطقه آب و هوايي ايران (پرباران، متوسط و کم باران) نمونه برداري شد و 850 جدايه خالص گرديد. پس از بررسي اثر آنتاگونيستي باکتري هاي جدا شده از مناطق مختلف و باکتري هاي کلکسيون گروه گياهپزشکي دانشگاه ولي عصر (عج) در شرايط آزمايشگاه 165 جدايه داراي قدرت بازدارندگي بودند. پس از انجام تستهاي بيوشيميايي 24 جدايه سودوموناس فلورسنت به همراه 6 جدايه کلکسيون PF-5، CHA0، CHA89(gac/A mutant)،UTPF101،P3 و P3-15 برايتست گلخانه به منظور انتخاب دو جدايه جهت فرمولاسيون انتخاب شدند. پس از پنج هفته شدت بيماري و شاخص هاي رشدي (وزن تر وخشک ريشه و اندام هوايي) بررسي گرديد. دو جدايه VUP50 و CHA0 به دليل تاثير مناسب بر شاخص هاي رشد و کاهش بيماري براي فرمولاسيون در حامل هاي تالک، پيت، پودر سيب، خاک اره پسته و پوست پسته انتخاب شدند. پس از پنج هفته فرمولاسيون تالک + CHA0 با 85 و 75 درصد تاثير بر وزن تر و خشک ريشه با شاهد اختلاف معني دار داشت. خاک اره + VUP50و پسته + CHA0 با 46 و 28 درصد تاثيرگذاري بر وزن تر و خشک اندام هوايي با شاهد اختلاف معني دار داشتند. فرمولاسيون هاي تالک، خاک اره، پسته + VUP50تالک و خاک اره + CHA0 سبب کاهش 70 درصدي شدت بيماري شدند. نتايج تعيين جمعيت پس از يک ماه نشان داد فرمولاسيون پيت و خاک اره با جمعيت 1011 کلني در بيشترين ميزان جمعيت را داشتند. کلمات کليدي:biological control، formulation، Pseudomonas fluorescens، لوبيا فصل اول مقدمه پاتوژن هاي گياهي بر روي سلامت گياهان اثر مي گذارند و تهديد مزمني براي توليدات کشاورزي در کل اکوسيستم ها مي باشند. توليدات کشاورزي سخت تر از دهه هاي گذشته شده است(Compantet al., .(2005 علي رغم استفاده از تمامييافته هاي گياهپزشکي و ابزارهاي موجود براي محافظت از گياهان در حدود يک سوم از محصولات کشاورزي توسط آفات و بيماري ها از بين مي رود (Nakkeeran et al., 2005). استفاده از مواد شيميايي تاثيرات مثبتي داشته و کمک زيادي به افزايش و بهبود محصولات غذايي کرده است. افزايش قيمت مواد شيميايي و تقاضا براي مواد غذايي عاري از مواد شيميايي منجر به جستجو براي روش هاي جايگزين شده است (Kloepper, 1993). عدم موفقيت در صادرات محصولات زراعي و باغي بعلت باقيمانده سموم شيميايي از يکطرف و تاثير اندک روش شيميايي در کنترل عوامل بيماري زاي خاکزي، هزينه هاي اقتصادي و همچنين کاهش تاثير آن ها بدليل ظهور نژادهاي مقاوم سبب محدوديت استفاده از سموم شده است.(Whips, 2001; Glimour, 2001) کاربرد مواد شيميايي از قبيل سموم و کودهاي شيميايييکي از اساسي ترين چالش هاي قرن حاضر است به طوري که در بسياري از نقاط جهان بدليل بهره برداري نادرست و کاربرد بي رويه انواع نهاده هاي کشاورزي، وسعت قابل توجهي از زمين هاي کشاورزي تخريب شده اند (Glimour, 2001). بعلاوه مشکلاتي از قبيل از بينرفتن ميکروارگانيسم هاي مفيد، مسموميت کارگران و ... استفاده از مواد شيميايي را محدود مي کند. دلايل فوق دستيابي به روش هاي سالم و ارزانتر را بعنوان يک چالش جدي فراوري محققان قرار داده است. در اين حرکت استفاده از مواد بيولوژيک در کنترل بيماري هاي گياهي مورد توجه قرار گرفته است که در اين بين باکتري هاي آنتاگونيست از جايگاه ويژه ايي برخوردار هستند. عوامل کنترل زيستي، رشد گياه را زياد کرده و مکانيزم مقاومت را در ميزبان فعال مي کند. باکتري هاي آنتاگونيست خصوصاً سودموناس هاي فلورسنت با توليد يکسري متابوليت هاي ضدميکروبي و آنتي بيوتيک، سيانيد هيدروژن، سيدروفور،پروتئاز و پديده رقابت و ... نقش موثريدر کنترل بيماري هاي خاکزي دارند (Lopper, 2006). از جمله بيمارگرهاي مهم خاکزي ميتوان Rhizoctonia solani Kuehnعامل مرگ گياهچه، پوسيدگي بذر، پوسيدگي ريشه و طوقه لوبيا را نام برد. اين قارچ ممکن است عامل بيماري بسياري از گياهان باشد و يا بصورت ساپروفيت در خاک زندگي کند. گونه R. Solaniداراي دامنه وسيع از نژادهاي بيماريزا است که برخي فقط محدود به يک گونه ميزبان مي باشند و برخي دامنه وسيعي از ميزبان ها را دارا هستند. انتشار وسيع جغرافيايي، بالا بودن قدرت بيماريزايي، دوام و قدرت ساپروفيتي بالا، اين قارچ را از نظر بيماريزايي با اهميت نموده است و از طرفي پيچيدگي محيط خاک و عدم کارايي روش هاي متداول کنترل شيميايي، مديريت بيماري هاي خاکزاد را دشوار مي سازد. از اين رو استفاده از ارقام مقاوم در ترکيب با تناوب زراعي و ساير روش ها در کنترل تلفيقي توصيه مي شود (Agrios, 2005). در پاسخ به شرايط محيطي سالم و جايگزيني آفت کش ها، لازم است روشي براي کنترل آفات و بيماري ها در مديريت تلفيقي بسنجيم. با اين حال به نظر مي رسد که برخي آفت کش ها در آينده استفاده شوند و اعتماد بيشتري به آن ها نسبت به عوامل کنترل بيولوژيک باشد اما عوامل کنترل بيولوژيک دامنه عمل کمتري نسبت به سموم دارند و نمايش ناسازگاري در مزرعه دارند و اين دلايل اصلي محدوديت استفاده از آن ها براي کنترل بيماري هاست. پيچيدگي اکوسيستم خاک، موفقيت عوامل بيوکنترل را در خاک به چالش کشانده است و بنابراين تأثير عوامل زنده و غيرزنده بايد به خوبي مطالعه شوند (Saravanan et al., 2004). يک علم کامل در مورد مکانيسم و طريقه عمل مربوط به کنترل بيماري به انتخاب گزينه مطمئن کمک خواهد کرد که جهت توليد محصول تجاري قابل اطمينان براي صنايع باشد .(Collins et al.,2005) تاکنون افراد زيادي پتانسيل استفاده از باکتري هاي همراه گياهان در تحريک رشد گياهان، مديريت خاک و مديريت سلامت گياهان شرح داده اند. در سالهاي اخير امکان کنترل بيولوژيکي عوامل بيماري زاي گياهي با استفاده از ميکروارگانيسم هاي آنتاگونيست بخصوص جنس سودوموناس و باسيلوس مطرح شده است (2001 ,Dekkers &Lugtenberg). اين دو جنس در ريزوسفر به فراواني وجود دارند و در مقايسه با کل خاک ريزوسفر سرشار از مواد غذايي است و زمينه را براي گسترش جمعيت ميکروبي در اطراف ريشه فراهم مي کند و اين حالت بعنوان اثر ريزوسفر شناخته مي شود. بنابراين ميکروارگانيسم هاي که در ناحيه ريزوسفر زندگي مي کنند خط مقدم دفاعي ريشه عليه بيماري هاي خاکزي مي باشند (.(Oberhansli,1991 سودوموناس هاي فلورسنت بخش قابل توجهي از جمعيت بومي را در خاک هايي که به طور طبيعي بازدارنده از برخي بيماري ها هستند و نيز ساير خاک ها مي باشند را تشکيل مي دهند (Hass & Heal, 2003). همچنين باکتري هاي سودوموناس داراي ويژگي هاي متعددي اند که آن ها را شايسته ريزوسفر کرده است از جمله: سرعت رشد، سرعت کلونيزاسيون بالا و توليد آنتي بيوتيک، HCNو ... . تحقيقات متعددي گزارش کردند استفاده از PGPRها براي کنترل برخي از بيماري ها از کنترل شيميايي اين بيماري ها جلوگيري کرده است. اگرچه کنترل بيولوژيک توسط ريزوباکتري هاي افزايش دهنده رشد گياهان (PGPB)دستاورد قابل قبولي است اما متاسفانه عملکرد متفاوت استرين هاي بيوکنترل در شرايط مختلف، فصلي بودن محصولات کشاورزي و همچنين ناکافي بودن اطلاعات اکولوژيکي در مورد آنتاگونيست ها و مشکل استقرار آن ها در محيط مانع پيشرفت تجاري اين موضوع شده است ((Hass & Defago, 2005. تکنولوژي زماني پويا مي شود که يافته هاي آزمايشگاهي به مزرعه منتقل شوند(Nakkeeran, 2005) . استفاده از باکتري هاي آنتاگونيست ممکن است تحت شرايط مزرعه در کنترل بيماري تأثير متوسط داشته و يا بدون اثر باشد((Raupach & Kloepper, 1998. قبل از کنترل بيولوژيک، بايد مراحل خاصي تکميل شود که براي بنا نمودن و اثر بيو کنترل در شرايط مختلف جوي لازم است. يکي از مهمترين مشکلات در بيوکنترل زنده نگه داشتن عامل کنترل در طول دوره انبارداري است. کاربرد آسان، سهولت حمل و نقل، نگهداري طولاني مدت، حفظ قدرت حيات و افزايش کارايي در مزرعه و تجاري سازي بايد مورد توجه قرارگيرند Nakkeeran, 2005)). توليد فرمولاسيون هايي با عمر انبارداري بيشتر و طيف گسترده تر، به همراه تأثير طولاني مدت در شرايط مزرعه، زمينه را براي سرعت بخشيدن در تجاري سازي اين تکنولوژي فراهم مي کند. در واقع توسعه فرمولاسيون و کاربرد آن ها براي توسعه و پايداري عامل بيوکنترل لازم است (.(Osburn et al., 1995 اهداف تحقيق: 1-جدا کردن باکتري از مناطق مختلف آب و هوايي ايران 2-برسي کنترل قارچ Rhizoctonia solani AG-4توسط باکتري هاي جدا شده در شرايط آزمايشگاه و انتخاب جدايه هاي آنتاگونيست 3-برسي کنترل قارچ R. solani توسط جدايه هاي آنتاگونيست در شرايط گلخانه و انتخاب جدايه هاي برتر 4-فرمولاسيون جدايه هاي برتر در شرايط آزمايشگاه در حامل هاي ارزان قيمت و تاثير فرمولاسيون ها بر روي قارچ R. solani درگلخانه دریافت فایل جهت کپی مطلب از ctrl+A استفاده نمایید نماید |